2DWestern blot概述

2D-WB是雙向電泳與傳統(tǒng)western blot相結合的一項技術。一般實驗流程為抗原蛋白混合物經雙向電泳分離，然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上，再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可檢測出抗原等電點或分子量發(fā)生的微小變化，在蛋白翻譯后修飾研究領域有廣泛應用；而2D-WB結合質譜鑒定技術，還可能從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

 

技術服務流程

 

2DWestern blot技術服務內容

1、蛋白質抽提與定量；  2、雙向電泳；  3、轉膜，封閉，孵育，顯示成像。 

送樣須知

樣本應避免各類污染和反復凍融，妥善保存，用干冰或液氮包裝寄送；廣州本地客戶可上門收樣。   注：接收組織、細胞、蛋白質溶液等樣品；相應一抗如果公司抗體庫里沒有，也需要客戶自己提供。 

2DWestern blot技術服務報告內容

1、蛋白質定量結果及電泳上樣量；  2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果； 3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

 

2DWestern blot實驗服務案例

 

實驗服務周期及收費標準

咨詢本公司QQ/電話：400 699 1663

 

質量承諾

提供清晰、客觀的2D Western blot結果。

 附：2DWestern blot實驗步驟

1、樣本制備，盡可能溶解全部蛋白質，破壞蛋白與蛋白間的相互作用，避免其他雜質的干擾，與IEF兼容等。2、雙向電泳的主要步驟，**向電泳（IEF），膠條平衡，第二向電泳SDS-APGE。3、第二向電泳結束后，取出凝膠進行轉膜，可選濕法轉移和半干法轉移。常用NC膜和PVDF膜。4、封閉，5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時（室溫）或過夜（4度）。5、一抗孵育，根據抗體說明書選擇孵育時間，常規(guī)的孵育條件是室溫1小時或4度過夜，一抗孵育后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。6、二抗孵育：根據一抗選擇合適的二抗（抗鼠、抗人、抗兔等），室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次，每次5分鐘。7、顯影：將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上，暗室中將膠片置于膜上，蓋上壓片夾，曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影，直到出現清晰的蛋白質條帶，清水漂洗后在定影液中定影，曝光時間需綜合考慮蛋白質的上樣量，抗體稀釋濃度，抗體孵育時間等。8、定影后，清洗膠片，晾干，標定marker，掃描圖片和2D Western blot圖片分析。查看部分客戶發(fā)表SCI論文