技術(shù)概述
TMT?(Tandem Mass Tag?)技術(shù)是由美國(guó)Thermo Scientific公司研發(fā)的一種多肽體外標(biāo)記技術(shù)。該技術(shù)采用10種同位素的標(biāo)簽,標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán),經(jīng)過(guò)LC-MS/MS分析,可同時(shí)比較10組不同樣品中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量。 TMT技術(shù)是常用的差異蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),在疾病標(biāo)記物篩選、藥物作用靶點(diǎn)、動(dòng)植物抗病/抗脅迫機(jī)制、動(dòng)植物發(fā)育分化機(jī)理等領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。技術(shù)原理
TMT試劑由三部分組成:質(zhì)量報(bào)告基團(tuán)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化基團(tuán)和氨基反應(yīng)基團(tuán)。
質(zhì)量報(bào)告基團(tuán)有10種不同的分子量,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化基團(tuán)也10有種不同的分子量,與不同的報(bào)告基團(tuán)搭配,能保證被標(biāo)記的不同來(lái)源的同一肽段在一級(jí)質(zhì)譜中具有相同的質(zhì)荷比;氨基反應(yīng)基團(tuán)能與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價(jià)連接使肽段連上標(biāo)記。
一級(jí)質(zhì)譜中,任何一種TMT試劑標(biāo)記的不同樣品中的同一肽段表現(xiàn)出相同的質(zhì)荷比;二級(jí)質(zhì)譜中,可切割鍵(箭頭所指)斷裂釋放出TMT報(bào)告離子,在質(zhì)譜低質(zhì)量區(qū)產(chǎn)生了10個(gè)TMT報(bào)告離子峰,其強(qiáng)度反應(yīng)了該肽段在不同樣品中的相對(duì)表達(dá)量信息,另外二級(jí)質(zhì)譜中的肽段碎片離子峰質(zhì)荷比反應(yīng)了該肽段的序列信息;這些質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,可得到蛋白質(zhì)的定性和相對(duì)定量信息。
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
1. 靈敏度高:低豐度蛋白也能檢測(cè)出;
2. 適用范圍廣:幾乎可對(duì)任何物種的各類蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定;
3. 高通量:能同時(shí)對(duì)10組樣本中包含的蛋白進(jìn)行鑒定及表達(dá)差異分析;
4. 高效:液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜連用,自動(dòng)化操作,分析速度快,分離效果好。
技術(shù)流程
蛋白樣本制備——胰酶酶解——TMT標(biāo)記——肽段混合——LC-MS/MS檢測(cè)——數(shù)據(jù)庫(kù)檢索——數(shù)據(jù)分析
服務(wù)信息
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