企業(yè)特殊行業(yè)經(jīng)營資質(zhì)信息公示
營業(yè)執(zhí)照已認(rèn)證 
點(diǎn)擊圖片查看原圖慢病毒包裝
一、慢病毒服務(wù)簡介
慢病毒（Lentivirus）載體是以人類免疫缺陷I型病毒(HIV-1)為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因載體。它是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，能使外源基因整合入宿主的基因組穩(wěn)定、長期表達(dá)，但卻比一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度和更廣的宿主范圍。攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝載體(表達(dá)病毒包裝所需輔助蛋白)一同轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞，即可進(jìn)行病毒的包裝；經(jīng)收集和濃縮的慢病毒液可以直接用于感染宿主細(xì)胞或活體動物模型。
輝駿生物使用的慢病毒包裝系統(tǒng)是4質(zhì)粒包裝系統(tǒng)，包括1個(gè)慢病毒表達(dá)載體和3個(gè)慢病毒包裝載體(分別表達(dá)病毒包裝必需的蛋白Gag/Pol、Rev和VSV-G)，包裝細(xì)胞為293T細(xì)胞。
輝駿生物提供包含多種熒光基因(如GFP或RFP等)、多種抗性篩選標(biāo)簽和多種啟動子的慢病毒載體，可充分滿足客戶不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求。
?
二、慢病毒表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)
1> 能將外源基因有效地整合入宿主染色體上，介導(dǎo)目的基因穩(wěn)定、長期的表達(dá)；
2>慢病毒有更廣泛的宿主范圍，能夠有效地感染分裂細(xì)胞、非分裂細(xì)胞，特別適合于一些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞（如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞）和對腺病毒感染具有較強(qiáng)免疫反應(yīng)的細(xì)胞（如樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞）等；
3> 適用范圍更廣，不僅能用于體外實(shí)驗(yàn)，還能用于活體動物模型。
4>不需要轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高，目的基因整合到宿主細(xì)胞基因組的概率大大增加；
5>可用于研究基因的過表達(dá)、microRNA過表達(dá)和RNAi等。
6>利用慢病毒建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的時(shí)間較常規(guī)真核表達(dá)載體更短，能大大縮短實(shí)驗(yàn)周期、提高實(shí)驗(yàn)效率。
?
三、慢病毒技術(shù)整體流程
A.慢病毒載體的構(gòu)建：根據(jù)客戶的不同需要，將目的基因片段連接至慢病毒載體；
B.慢病毒包裝：重組病毒質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行包裝；收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞上清液，濃縮后進(jìn)行滴度測試，得到滴度≥1×108TU/mL的慢病毒液；
C.穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的建立：分別使用實(shí)驗(yàn)組和對照組慢病毒感染細(xì)胞，利用抗生素初步篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，細(xì)胞分選得到單克隆細(xì)胞株，建立實(shí)驗(yàn)組和對照組的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。
???在慢病毒的包裝系統(tǒng)中，慢病毒表達(dá)載體攜帶病毒包裝和復(fù)制所需的順式作用元件和外源基因表達(dá)盒，3個(gè)包裝質(zhì)粒反式提供病毒包裝必需的蛋白。輝駿生物提供多種慢病毒表達(dá)載體，具體元件如下圖所示，除此之外，客戶還可以根據(jù)需要更換啟動子、熒光基因或抗性基因。
?
五、慢病毒技術(shù)服務(wù)項(xiàng)目
?
表1慢病毒服務(wù)項(xiàng)目及內(nèi)容
分類 | 服務(wù)編號 | 項(xiàng)目名稱 | 客戶提供 | 服務(wù)描述 |
RNAi慢病毒服務(wù) | FG101 | RNAi慢病毒載體構(gòu)建 | 目標(biāo)基因登錄號或序列 | (1)設(shè)計(jì)并合成1條干擾序列 (2)構(gòu)建載體 |
FG102A | RNAi慢病毒包裝套餐A | 目標(biāo)基因登錄號或序列 | (1)設(shè)計(jì)并合成3條干擾序列(保證至少有1個(gè)靶序列的干擾效率大于70%) (2)分別構(gòu)建3條載體 (3)分別進(jìn)行3次慢病毒包裝 | |
FG102B | RNAi慢病毒包裝套餐B | 設(shè)計(jì)好的有效靶點(diǎn)序列 | (1)構(gòu)建載體 (2)慢病毒包裝 注:可提供多條干擾序列 | |
FG103A | RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐A | 目標(biāo)基因的序列 | (1)設(shè)計(jì)并合成3條干擾序列 (2)分別構(gòu)建3條載體 (3)分別進(jìn)行3次慢病毒包裝 (4)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株(得到至少1個(gè)有效干擾的細(xì)胞株) | |
FG103B | RNAi穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐B | 設(shè)計(jì)好的有效靶點(diǎn)序列 | (1)構(gòu)建載體 (2)慢病毒包裝 (3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 | |
基因過表達(dá)慢病毒服務(wù) | FG111 | 基因過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建 | 目標(biāo)基因的模板 | 構(gòu)建載體 |
FG112 | 基因過表達(dá)慢病毒包裝套餐 | 目標(biāo)基因的模板 | (1)構(gòu)建載體 (2)慢病毒包裝 | |
FG113 | 過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建套餐 | 目標(biāo)基因的模板 | (1)構(gòu)建載體 (2)慢病毒包裝 (3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 | |
microRNA慢病毒服務(wù) | FG121 | microRNA過表達(dá)載體構(gòu)建 | microRNA前體或初始產(chǎn)物模板 | 構(gòu)建載體 |
FG122 | microRNA過表達(dá) 慢病毒包裝套餐 | microRNA前體或初始產(chǎn)物模板 | (1)構(gòu)建載體 (2)慢病毒包裝 | |
FG123 | microRNA過表達(dá) 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建 | microRNA前體或初始產(chǎn)物模板 | (1)構(gòu)建載體 (2)慢病毒包裝 (3)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株 |
特別提醒：
（1）基因過表達(dá)慢病毒服務(wù)適用于目標(biāo)基因長度為2000bp以下的片段，2000bp以上的請具體咨詢；
（2）我公司亦可進(jìn)行基因釣取和WB檢測服務(wù)，但費(fèi)用不包含在總套餐之內(nèi)，需根據(jù)實(shí)際情況收費(fèi)；
（3）客戶如對所需病毒量（TU）及病毒液滴度范圍有特殊要求需提前告知，我公司一般提供的病毒滴度在1×108~1×109TU/mL之間，規(guī)格為1mL；
（4）若實(shí)驗(yàn)材料為原代細(xì)胞和需要特殊培養(yǎng)的細(xì)胞，請具體咨詢；
（5）客戶亦可根據(jù)特殊要求進(jìn)行慢病毒產(chǎn)品定制服務(wù)。
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果提交
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，我公司會提交完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括：
1. 客戶定制的相應(yīng)載體、病毒液或穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；
2. 慢病毒液滴度測定報(bào)告單；
3. 慢病毒載體的測序結(jié)果和峰圖、引物序列、載體圖譜；
4. 全部實(shí)驗(yàn)圖片；
5. 詳細(xì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
?
?
