供應(yīng)Western blot技術(shù)服務(wù)
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廣州輝駿生物科技股份有限公司普通會(huì)員
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供應(yīng)Western blot技術(shù)服務(wù)
詳細(xì)信息
一、Western blot概述 WesternBlot采用的是變性聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳分離蛋白質(zhì)混合物,經(jīng)過(guò)SDS-PAGE分離的蛋白質(zhì)被到轉(zhuǎn)移到固相支撐物(NC膜,PVDF膜等)上后,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持膜上蛋白質(zhì)或多肽的抗原性質(zhì)不變,以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與其對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶標(biāo)記的二抗體起反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色以檢測(cè)特異蛋白質(zhì)表達(dá)水平。由于Western blot檢測(cè)技術(shù)具有簡(jiǎn)便,快捷等特點(diǎn),所以目前該技術(shù)也被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)。三、技術(shù)服務(wù)服務(wù)內(nèi)容 1、蛋白質(zhì)抽提與定量; 2、Western blot 3、圖片分析;4、Western blot實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。四、送樣須知,為了保證Westernblot實(shí)驗(yàn)?zāi)茼樌M(jìn)行,樣品寄送需滿(mǎn)足以下要求:顧客提供:組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)溶液等;一抗(如果公司抗體庫(kù)里沒(méi)有)。 運(yùn)輸要求:干冰或液氮包裝寄送,廣州本地客戶(hù)可上門(mén)收樣。注:樣本應(yīng)避免各類(lèi)污染和反復(fù)凍融。 五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容 1、Westernblot蛋白質(zhì)濃度及電泳上樣量; 2、原始膠片和電子圖片、圖片分析結(jié)果; 3、Westernblot完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器和試劑等。 六、實(shí)驗(yàn)案例七、服務(wù)周期及收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn): 歡迎登陸 服務(wù)熱線(xiàn) 400-699-1663八、服務(wù)質(zhì)量承諾:利用內(nèi)參**定量,并提供清晰、客觀的western結(jié)果。附:Western blot 實(shí)驗(yàn)步驟 1、Westernblot蛋白質(zhì)提?。焊鶕?jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌x擇不同的裂解液,如RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液,同時(shí)根據(jù)蛋白質(zhì)提取組分的不同選擇不同的方法,如提取核蛋白,細(xì)胞質(zhì)蛋白,膜蛋白等。2、蛋白定量,根據(jù)蛋白質(zhì)的提取條件不同,可采取不同的定量方法,如bradford法、BCA法等。3、電泳,依據(jù)需要檢測(cè)蛋白的分子量選取分離膠的濃度,分別配置分離膠和積成膠,凝膠凝固后進(jìn)行蛋白質(zhì)上樣和電泳。4、轉(zhuǎn)膜,可采取半干法和濕法轉(zhuǎn)移,當(dāng)采取半干法轉(zhuǎn)膜時(shí)需防止短路:從下到上的順序:濾紙/PVDF膜/凝膠/濾紙/陰極(bio-rad轉(zhuǎn)膜儀)。5、封閉:5%脫脂奶粉或5% BSA封閉過(guò)夜或室溫1小時(shí),孵育時(shí)間可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行改變。6、一抗孵育,5%脫脂奶粉稀釋一抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時(shí)4度過(guò)夜,孵育時(shí)間可參考抗體說(shuō)明書(shū),并加以?xún)?yōu)化,一抗孵育后TBST洗膜3次,每次5分鐘。7、 二抗孵育,5%脫脂奶粉稀釋二抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時(shí),TBST洗膜3次,每次5分鐘。8、顯影(ECL法):將A、B兩種底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,置于壓片盒中,迅速蓋上膠片,關(guān)閉膠盒進(jìn)行曝光,曝光一定時(shí)間后取出膠片,浸入顯影液中顯影,直到出現(xiàn)清晰的蛋白質(zhì)條帶,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水沖凈晾干,標(biāo)定Marker,掃描膠片和Westernblot 圖片分析。
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