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服務(wù)簡介：
???????TAP/MS是Co-IP/MS的“近親”，兩者在尋找誘餌蛋白的互作蛋白以及純化互作蛋白的原理類似。不同的是TAP/MS引入了2個(gè)純化標(biāo)簽（strep或SBP，flag），2步純化，能有效純化裂解液中的靶蛋白及其復(fù)合物，并使非特異性蛋白的數(shù)量降至較低水平。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組洗脫的蛋白分別做質(zhì)譜，從實(shí)驗(yàn)組結(jié)果中扣除對(duì)照組中的蛋白，即可鑒定出與靶蛋白互作的蛋白。


技術(shù)優(yōu)勢：
? 1、TAP/MS鑒定到的互作蛋白是細(xì)胞內(nèi)與誘餌蛋白天然互作的，符合體內(nèi)真實(shí)生理情況，可信度高。
? 2、采用兩步純化，能有效減少非特異蛋白的結(jié)合。


服務(wù)內(nèi)容:
? 1、構(gòu)建Flag-strep（或Flag-SBP）雙標(biāo)簽的靶基因表達(dá)載體；
? 2、包裝慢病毒感染目的細(xì)胞，做成過表達(dá)細(xì)胞株，WB檢測表達(dá)效果（基因大于2kb時(shí)，可能導(dǎo)致病毒滴度不足以感染細(xì)胞系，此時(shí)如需進(jìn)行加藥篩選構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，則周期預(yù)計(jì)延長3-4周）；
? 3、細(xì)胞總蛋白，經(jīng)streptactin 樹脂（或strep磁珠）和anti-flag抗體兩步純化，并洗脫；
? 4、實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的洗脫液分別用胰酶酶解；
? 5、LC-MS/MS分析，獲得蛋白質(zhì)的定量、定性信息；
? 6、實(shí)驗(yàn)組結(jié)果扣除對(duì)照組中的蛋白，即可得到與靶蛋白互作的蛋白。